產(chǎn)品介紹:
SAFIRE(Sodium Azide Free Immensely Reduced Endotoxins)類產(chǎn)品是BioGems品牌下的功能性抗體,經(jīng)特殊工藝生產(chǎn)、純化,具有諸多優(yōu)點,可用于免疫細(xì)胞功能的激活、阻斷、中和研究,是腫瘤免疫研究的重要工具。
1、極低的內(nèi)毒素含量,低于0.01EU/μg蛋白;
2、無疊氮鈉,適用于體內(nèi)或體外實驗;
3、高蛋白純度。
助力CAR-T及免疫細(xì)胞治療研究
CAT-T活化:CD3/CD28激發(fā)型抗體
小鼠脾臟T細(xì)胞的擴增方案
小鼠CD3/CD28功能性抗體:
1、用PBS稀釋配置anti-CD3功能性抗體并鋪板,濃度為1-5μg/ml。根據(jù)需要選擇并計算所需抗體的量。以96孔板為例,每孔加入50 μl(6孔板500μl)。37℃ 2h或者4℃過夜(過夜包被效果比較好)。
2、加入細(xì)胞前吸去孔內(nèi)抗體溶液,加入200μl(6孔板2ml)PBS洗滌2次,去除未結(jié)合抗體。
3、研磨小鼠脾臟,PBS洗滌細(xì)胞1次,離心后的沉淀彈散,加入2ml紅細(xì)胞裂解液(1X)(Cat#64010-00-100),室溫裂解5min,用完全培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。(注:推薦使用BioGems紅細(xì)胞裂解液,裂解溫和,對骨髓細(xì)胞損傷小!)
4、用含有anti-CD28(1-2ug/ml)以及IL-2(10-50ng/ml)的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,加入96孔板(或6孔板內(nèi))。(96孔板加入3×105 細(xì)胞,6孔板加入5-8×106 細(xì)胞)。
5、培養(yǎng)過程中隔天換液,進行細(xì)胞計數(shù)并觀察細(xì)胞狀態(tài),培養(yǎng)3-5天即可見到細(xì)胞明顯增殖。